潔凈室回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口微生物透過(guò)率檢測(cè)方法如下：

1. 儀器設(shè)備和材料應(yīng)符合以下要求：

      （1） 儀器設(shè)備：

      90玻璃平皿（或塑料平皿）；

      空氣微生物采樣器（固體撞擊式采樣器、離心式采樣器、液體沖擊式采樣器等均可使用，常用的為安德遜（Andersen）采樣器，隸屬于固體撞擊式采樣器）；

      微生物氣溶膠發(fā)生器（由氣泵、油水分離器、流量計(jì)、高效過(guò)濾器、噴霧器、緩沖瓶等組成）；

      各種玻璃移液管、吸管、試管、容器瓶等；

      計(jì)時(shí)器（如秒表）；

      恒溫培養(yǎng)箱；

      潔凈工作臺(tái)；

      高壓蒸汽消毒鍋。

（2）材料：

      胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基；

      生理鹽水；

      75％酒精；

      菌種（宜選用毒性小或沒有毒性，且便于區(qū)別大氣雜菌的特定菌種，常用的有枯草芽孢桿菌、黏質(zhì)沙雷氏菌、大腸噬菌體等）；

      采樣介質(zhì)可選用硅酮類、石油胨類、醇類、糖類、纖維素類、蛋白類、混合類、組織培養(yǎng)液等；

      套筒（測(cè)定回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口時(shí)需要使用，罩住整個(gè)人口，使檢漏范圍包括邊框，長(zhǎng)度應(yīng)使通過(guò)氣流時(shí)間為0.5s～1s，見圖F.1.1）。

2. 透過(guò)率應(yīng)按以下方法評(píng)價(jià)：

      在回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口進(jìn)風(fēng)端加設(shè)套筒，在套筒口部發(fā)生微生物氣溶膠，在過(guò)濾器出風(fēng)面用浮游菌法采樣，由回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口前后的微生物氣溶膠濃度可計(jì)算得出微生物透過(guò)率。

3. 檢測(cè)步驟應(yīng)符合下列要求：

      （1）制定方案：明確評(píng)價(jià)任務(wù)，制定詳細(xì)的評(píng)價(jià)方案，包括確定微生物氣溶膠、發(fā)生器所需的菌液濃度、潔凈壓縮空氣流量，確定在回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口出風(fēng)端的微生物采樣周期、采樣次數(shù)等，一般可根據(jù)回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口的塵埃顆粒物過(guò)濾效率進(jìn)行計(jì)算。

      （2）實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：根據(jù)預(yù)先制定的評(píng)價(jià)方案，準(zhǔn)備所需材料、儀器設(shè)備，制作采樣培養(yǎng)皿，一般而言，采樣細(xì)菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，采集真菌用沙氏或真菌選擇培養(yǎng)基，采樣病毒用根據(jù)病毒特性配制的采樣介質(zhì)。

      （3） 發(fā)生微生物氣溶膠：將培育好的高濃度微生物溶液，一般為（108～1010）cfu/mL，利用生理鹽水按10倍稀釋法逐次稀釋至需要的低濃度（步驟1確定的濃度），然后由移液管、吸管量取一定容積的低濃度微生物溶液至氣溶膠發(fā)生裝置的溶液瓶，由微生物氣溶膠發(fā)生器在回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口的進(jìn)風(fēng)端將微生物溶液霧化發(fā)生微生物氣溶膠。

      （4） 采樣：對(duì)于回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口，可在其后的出風(fēng)管道中采樣，離排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口的距離根據(jù)實(shí)際工程而定，原則上出風(fēng)后有所混合，能近則好，采樣點(diǎn)沿風(fēng)管寬度方向均勻布置3點(diǎn)。采樣周期、采樣次數(shù)按預(yù)先制定的評(píng)價(jià)方案執(zhí)行。采樣過(guò)程中，不能中斷微生物氣溶膠的發(fā)生，采樣結(jié)束后才能停止發(fā)生微生物氣溶膠，此后噴霧器中必須尚存不少于一半的微生物溶液，且需對(duì)剩余菌液活性進(jìn)行涂布法驗(yàn)證，以修正菌液濃度。

      （5） 培養(yǎng)：將采好的平皿立即蓋上蓋，細(xì)菌類在（35～37）℃培養(yǎng)（1～2）d，結(jié)核菌培養(yǎng)3周，真菌在28℃培養(yǎng)3d。上述培養(yǎng)時(shí)間可根據(jù)所采樣微生物特性而適當(dāng)調(diào)整，培養(yǎng)的過(guò)程中應(yīng)定期觀察培養(yǎng)箱內(nèi)菌落的生長(zhǎng)情況，避免培養(yǎng)箱內(nèi)干燥菌落不長(zhǎng)或培養(yǎng)皿內(nèi)菌落過(guò)多充分生長(zhǎng)匯合等情況的發(fā)生。

      （6） 計(jì)數(shù)：可以目測(cè)、電子顯微鏡、菌落計(jì)數(shù)器等對(duì)采集到且培養(yǎng)好的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，當(dāng)采到的菌落很多時(shí)，在它們未生長(zhǎng)匯合前，用顯微鏡及早觀察，將平皿劃成許多相等的部分抽出一部分?jǐn)?shù)菌，然后乘以所劃份數(shù)，即可得出每皿總菌數(shù)。計(jì)數(shù)完畢后，可根據(jù)式（F.1.3-1）計(jì)算濃度：

C = N/(V?t_s)                   (F.1.3-1)

      式中：

      C——微生物氣溶膠濃度（cfu/L）；

      N——采樣到的微生物所形成的菌落數(shù)（cfu）；

      V——微生物采樣器的采樣流量（L/min）；

      t_s——采樣周期（min）。

（7） 微生物透過(guò)率計(jì)算：根據(jù)回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口前后的微生物氣溶膠濃度由式（F.1.3-2）可計(jì)算得出微生物透過(guò)率K：

K=C_d/C_u×100%               (F.1.3-2)

      式中：Cd-回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口后的微生物氣溶膠濃度（cfu/L），可由式（F.1.3-1）計(jì)算得出；

      Cu-回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口前的微生物氣溶膠濃度（cfu/L），可根據(jù)微生物溶液濃度C1（cfu/mL）、菌液消耗容積V（mL）、氣溶膠發(fā)生時(shí)間t（min）、風(fēng)口風(fēng)量G（L/min）由式（F.1.3-3）計(jì)算得出：

C_u = C₁?V/(G?t)     (F.1.3-3)

      （8） 消毒滅菌：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，需對(duì)剩余菌液以及所用各種儀器、設(shè)備、平皿等進(jìn)行消毒滅菌、酒精擦洗處理。

4. 在進(jìn)行潔凈室生物學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)符合以下要求：

      （1）正式試驗(yàn)前，應(yīng)進(jìn)行預(yù)備試驗(yàn)，并對(duì)各種儀器進(jìn)行調(diào)試和標(biāo)定。

      （2） 應(yīng)進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。

      （3） 應(yīng)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)。

      （4） 應(yīng)在陽(yáng)性試驗(yàn)中長(zhǎng)菌，陰性試驗(yàn)組不長(zhǎng)菌。

      （5） 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)做好各種儀器、設(shè)備、衣物等的消毒滅菌處理。

      （6） 試驗(yàn)結(jié)束后，需對(duì)微生物氣溶膠發(fā)生器內(nèi)的剩余菌液活性進(jìn)行涂布法驗(yàn)證，修正式（F.1.3-3）中的菌液濃度。

      （7） 采樣周期應(yīng)設(shè)計(jì)合理，當(dāng)確定采樣周期存在一定困難時(shí)，宜增加采樣次數(shù)，每次采樣使用不同的采樣周期。