1 范圍

      本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中浮游苗測(cè)試條件、測(cè)試方法。

      本標(biāo)準(zhǔn)適用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū),無(wú)菌室或局部空氣凈化區(qū)域（包括沽凈工作臺(tái)）的浮游弟的測(cè)試和環(huán)境的驗(yàn)證。

2 規(guī)范性引用文件

      下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款，凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

      GB/T 16292—2010

      JGJ 71-1990 潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范

3 術(shù)語(yǔ)和定義

      下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn).

3.1

      菌落 colony forming units

      微生物培養(yǎng)后，由一個(gè)或幾個(gè)微生物繁殖而形成的微生物集落，簡(jiǎn)稱CFU。通用用個(gè)數(shù)表示。

3.2

      浮游曲 airborne microbe

      用本標(biāo)準(zhǔn)提及的方法收集懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過(guò)專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長(zhǎng)條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。

3.3

      浮流菌濃度 airborne microbe concentration

      單位體枳空氣中含浮游菌菌落數(shù)的多少，以計(jì)數(shù)濃度表示，單位是個(gè)/m，或個(gè)/L。

3.4

      糾偏限度 action levels

      對(duì)于受控的潔凈室（區(qū)），由使用者自行設(shè)定微生物含量等級(jí)。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果超過(guò)該等級(jí)時(shí)，應(yīng)啟動(dòng)監(jiān)測(cè)程序?qū)υ搮^(qū)域的微生物污染情況立即進(jìn)行跟蹤。

3.5

      警戒限度 alert levels

      對(duì)于受控的潔凈室（區(qū)），由使用者自行設(shè)定一個(gè)微生物含量等級(jí)，從而給定了一個(gè)與正常狀態(tài)相比最早警戒的偏差值。當(dāng)超過(guò)該最早警戒的偏差值時(shí)，應(yīng)啟動(dòng)保證工藝或環(huán)境不受影響的程序及相關(guān)措施.

4 測(cè)試方法

4.1 方法提要

      本標(biāo)準(zhǔn)采用的方法是計(jì)數(shù)濃度法，即通過(guò)收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基（選擇 能證實(shí)其能夠支持微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基），經(jīng)若干時(shí)間和適宜的生長(zhǎng)條件讓其繁殖到可見的菌落計(jì)數(shù)， 以判定該潔凈室的微生物濃度。

4.2 人員的職責(zé)及培訓(xùn)

      潔凈室（區(qū)）的測(cè)試人員應(yīng)進(jìn)行本專業(yè)的培訓(xùn)并獲得相應(yīng)資格后才能履行對(duì)潔凈室（區(qū)）測(cè)試的職責(zé)，其中包含涉及的衛(wèi)生知識(shí)和基本微生物知識(shí)。

      潔凈室（區(qū)）的測(cè)試人員應(yīng)選擇與生產(chǎn)操作的空氣潔凈度級(jí)別要求相適應(yīng)的穿豉方式，外面的衣服不能帶進(jìn)100 000級(jí)以上的區(qū)域。

4.3 儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基

      選擇合適的浮游闕采樣器，包括采用無(wú)油的抽氣泵,較低的氣流流速和較大的采樣藻最，以保證培養(yǎng)基表面的水分不被吹干。

      本測(cè)試需要具備儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基如下：

      a）浮游菌采樣器；

      b）培養(yǎng)皿；

      c) 培養(yǎng)基（見本標(biāo)準(zhǔn)附錄B）；

      d）恒溫培養(yǎng)箱；

      e）高壓蒸汽滅菌器；

4.4 浮游菌采樣器原理

      浮游菌采樣器一般采用撞擊法機(jī)理，可分為狹縫式采樣器、離心式或針孔式果樣器,狹緩式采樣器由內(nèi)部風(fēng)機(jī)將氣流吸入，通過(guò)采樣器的狹縫式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉(zhuǎn)的平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，離心式采樣器由于內(nèi)部風(fēng)機(jī)的高速旋轉(zhuǎn)，氣流從采樣 器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時(shí)間撞擊到專用的固形培 養(yǎng)條上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，針孔式采樣器是氣流通過(guò)一個(gè)金屬荔吸入，蓋子上是 密集的經(jīng)過(guò)機(jī)械加工的特制小孔，通過(guò)風(fēng)機(jī)將收集到的細(xì)小的空氣流直接撞擊到平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落。

4.5 測(cè)試要點(diǎn)

4.5.1 必須按照測(cè)試儀器的檢定周期,定期對(duì)儀器作檢定.使用校驗(yàn)合格，且在使用有效期內(nèi)的儀器。

4.5.2 測(cè)試儀器在未進(jìn)入被測(cè)區(qū)域時(shí)，若必需,則先清潔表面，或在相應(yīng)的潔凈室內(nèi)準(zhǔn)備和存放（用保護(hù)罩或其他適當(dāng)?shù)赝庹直Ｗo(hù)儀器）。

4.5.3 在100級(jí)潔凈室內(nèi)用紙時(shí)，上面應(yīng)蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100級(jí)潔凈室內(nèi)不能用鉛筆和橡皮。

4.5.4 使用測(cè)試儀器時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明書操作。

4.5.4.1 儀器開機(jī)，預(yù)熱至穩(wěn)定后，方可按儀器說(shuō)明書的規(guī)定對(duì)儀器進(jìn)行校正，同時(shí)檢行采樣流量，并根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時(shí)間。

4.5.4.2 采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能稔定的材料制造。

4.5.4.3 采樣管嚴(yán)禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑。

4.5.4.4 采樣管的長(zhǎng)度應(yīng)根據(jù)瀏點(diǎn)的高度定，盡量減少?gòu)澢?/p>

4.6 培養(yǎng)皿

4.6.1一般采用Φ90 mm×15 mm規(guī)格的培養(yǎng)皿.可根據(jù)所選用采樣器選擇合適的培養(yǎng)皿。

4.6.2 離心式采樣器采用專用的固形培養(yǎng)條。

4.7 培養(yǎng)基

      大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）或沙氏培養(yǎng)基（SDA）或其他用戶認(rèn)可并經(jīng)驗(yàn)證了的培養(yǎng)基。其觀制方法見附錄B。

4.8 恒溫培賽箱

      必須定期對(duì)恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行校驗(yàn)。

4.9 測(cè)試步驟

4.9.1 測(cè)送前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。

4.9.1.1 采樣器進(jìn)入被測(cè)房間前先用消毒嚴(yán)格房間的消毒劑滅菌，用于100級(jí)潔凈室的采樣器宜預(yù)先放在被測(cè)房間內(nèi)。

4.9.1.2 用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。

4.9.1.3 采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及耳子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。

4.9.1.4 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對(duì)采樣管的外壁及內(nèi)壁進(jìn)行消毒時(shí)，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。

4.9.1.5 采樣者應(yīng)穿戴與被測(cè)潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒或帶無(wú)菌手套操作。

4.9.1.6 采樣儀器蛉消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā),時(shí)間不少于5 min，并檢查流母并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定采樣時(shí)間。

4.9.1.7 關(guān)閉浮游菌采樣器，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子。

4.9.1.8 置采樣口于采樣點(diǎn)后，開啟浮游菌采樣器進(jìn)行采樣。

4.10 培養(yǎng)

4.10.1 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4.10.2 采用大豆酪蛋白瓊脂珞養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30℃?35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20℃?25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),時(shí)間不少于5d。

4.10.3 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn),檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污雜,可每批選定3只培養(yǎng)肌作對(duì)照培養(yǎng)。

4.11 菌落計(jì)數(shù)

4.11.1 用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì),然后用5-10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.11.2 若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。

4.12 注意事項(xiàng)

4.12.1 使用前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用。

4.12.2 對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。

4.12.3 由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察,不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的曲落,并須注意細(xì)菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別,必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

5 測(cè)試規(guī)則

5.1 測(cè)試條件

      在測(cè)試之前，要對(duì)潔凈室（區(qū)）相關(guān)參數(shù)進(jìn)行預(yù)先測(cè)試，這類測(cè)試將會(huì)提供測(cè)試懸浮粒子的環(huán)境條件，例如:這種預(yù)先測(cè)試或可包括：

      a）溫度和相對(duì)濕度的測(cè)試，潔凈室（區(qū)）的溫度和相對(duì)濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)（無(wú)特殊要求時(shí)，溫度在18℃?26℃,相對(duì)濕度在45%?65%為宜），同時(shí)應(yīng)滿足測(cè)試儀器的使用范圍;

      b）室內(nèi)送風(fēng)員或風(fēng)速的瀏試，或壓差的測(cè)試；

      c）高效過(guò)濾器的泄漏測(cè)試。

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